蛋白質(zhì)相互作用分析

蛋白質(zhì)相互作用分析
免疫共沉淀法（CO-IP）結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析
GST融合蛋白Pull-down技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析
SILAC與免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析

1，免疫共沉淀法（CO-IP）蛋白質(zhì)相互作用分析

免疫共沉淀法（CO-IP）利用抗原抗體之間的特異性來檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的生理性相互作用的一種方式。首先在實(shí)驗(yàn)中為了最大限度的保留細(xì)胞中蛋白的相互作用，會(huì)使用非離子變性劑來裂解細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞裂解時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的蛋白相互作用被保存下來，在其中加入相應(yīng)的抗體，使抗體與細(xì)胞中的特異蛋白質(zhì)結(jié)合，再加入蛋白A/G形成抗體蛋白復(fù)合物，進(jìn)行離心、分離，使抗體蛋白復(fù)合物沉淀，棄去上清液，最后用質(zhì)譜技術(shù)鑒定沉淀下來的蛋白質(zhì)，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。僅適用于分析穩(wěn)定或者強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)間相互作用；通常用來鑒定某個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)與另一個(gè)蛋白質(zhì)之間相互作用或者被用來尋找與某個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)存在相互作用的未知蛋白質(zhì)。

百泰派克生物科技針對(duì)樣品蛋白的提取，表達(dá)和純化的優(yōu)化方案可確保獲得高質(zhì)量的誘餌和獵物蛋白，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的Co-IP蛋白互作分析服務(wù)及對(duì)免疫共沉淀CO-IP獲取的蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析。

• 優(yōu)點(diǎn)：可分離得到天然狀態(tài)下相互作用的蛋白復(fù)合物；
• 缺點(diǎn)：靈敏度較低；不能進(jìn)行親和力低和瞬間的蛋白質(zhì)相互作用分析檢測(cè)。

2，GST融合蛋白pull-down沉降技術(shù)的蛋白質(zhì)相互作用分析

GST融合蛋白pull-down沉降技術(shù)，利用基因重組將帶有GST標(biāo)簽的載體插入到目標(biāo)蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠與目標(biāo)融合蛋白結(jié)合，加入細(xì)胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入過量的谷胱甘肽進(jìn)行洗脫，最后用MS技術(shù)分析。這種方法主要是研究體外強(qiáng)烈或者穩(wěn)定的蛋白質(zhì)間相互作用；可以鑒定兩種已知的感興趣蛋白質(zhì)可能存在的直接相互作用；尋找可能與目標(biāo)蛋白存在相互作用關(guān)系的未知蛋白。

作為技術(shù)依托型的科研技術(shù)服務(wù)公司，百泰派克生物科技在蛋白互作分析服務(wù)及基于質(zhì)譜的互作蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定分析方面擁有多年經(jīng)驗(yàn)。百泰派克提供基于GST pull-down蛋白互作分析服務(wù)，及Pull-down靶蛋白質(zhì)譜鑒定服務(wù)。我們以嚴(yán)格的質(zhì)量控制和較短的檢測(cè)周期為特色，百泰派克向客戶提供可定制的一站式服務(wù)，涵蓋您項(xiàng)目中從基因合成到數(shù)據(jù)報(bào)告的每個(gè)步驟。

• 優(yōu)點(diǎn)：可排除細(xì)胞內(nèi)其他情況的干擾；可以直接檢測(cè)蛋白質(zhì)之間是否有相互作用；方法簡(jiǎn)單，操作方便。
• 缺點(diǎn)：在細(xì)胞外進(jìn)行，不能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系。

3，SILAC與免疫共沉淀質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析

利用SILAC方法分別標(biāo)記實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞后進(jìn)行Co-IP實(shí)驗(yàn)，依靠抗原與抗體之間的專一性反應(yīng)分離得到免疫復(fù)合物；再通過LC-MS/MS來定性/定量檢測(cè)免疫復(fù)合物中的蛋白；當(dāng)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中某個(gè)蛋白質(zhì)的含量達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異時(shí)，判定這個(gè)蛋白質(zhì)與研究的蛋白具有相互作用，可極大降低蛋白質(zhì)互作假陽性結(jié)果可能性。SILAC技術(shù)和Co-IP-MS技術(shù)結(jié)合可用于高通量定量分析在特定情況下蛋白的互作蛋白網(wǎng)。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供SILAC與免疫共沉淀質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析服務(wù)技術(shù)包裹（SILAC-based CoIP-MS），您只需要將您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們并將您的細(xì)胞寄給我們，我們會(huì)負(fù)責(zé)項(xiàng)目后續(xù)所有事宜，包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞標(biāo)記、蛋白提取、抗體IP、效率檢測(cè)、蛋白酶切、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。

How to order?Related Services

互作蛋白分析：

CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析GST pull-down蛋白相互作用分析

蛋白質(zhì)譜鑒定/質(zhì)譜分析：

蛋白膠點(diǎn)、膠條、IP樣品蛋白質(zhì)鑒定Pull-down靶蛋白質(zhì)譜鑒定