蛋白質相互作用分析

蛋白質相互作用分析
免疫共沉淀法（CO-IP）結合質譜聯用的蛋白互作分析
GST融合蛋白Pull-down技術結合質譜聯用的蛋白互作分析
SILAC與免疫共沉淀結合質譜聯用的蛋白互作分析

1，免疫共沉淀法（CO-IP）蛋白質相互作用分析

免疫共沉淀法（CO-IP）利用抗原抗體之間的特異性來檢測蛋白質之間的生理性相互作用的一種方式。首先在實驗中為了最大限度的保留細胞中蛋白的相互作用，會使用非離子變性劑來裂解細胞。當細胞裂解時，細胞內的蛋白相互作用被保存下來，在其中加入相應的抗體，使抗體與細胞中的特異蛋白質結合，再加入蛋白A/G形成抗體蛋白復合物，進行離心、分離，使抗體蛋白復合物沉淀，棄去上清液，最后用質譜技術鑒定沉淀下來的蛋白質，進而證明兩者間的相互作用。僅適用于分析穩定或者強烈的蛋白質間相互作用；通常用來鑒定某個目標蛋白質與另一個蛋白質之間相互作用或者被用來尋找與某個目標蛋白質存在相互作用的未知蛋白質。

百泰派克生物科技針對樣品蛋白的提取，表達和純化的優化方案可確保獲得高質量的誘餌和獵物蛋白，為客戶提供優質的Co-IP蛋白互作分析服務及對免疫共沉淀CO-IP獲取的蛋白進行蛋白質譜分析。

• 優點：可分離得到天然狀態下相互作用的蛋白復合物；
• 缺點：靈敏度較低；不能進行親和力低和瞬間的蛋白質相互作用分析檢測。

2，GST融合蛋白pull-down沉降技術的蛋白質相互作用分析

GST融合蛋白pull-down沉降技術，利用基因重組將帶有GST標簽的載體插入到目標蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠與目標融合蛋白結合，加入細胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入過量的谷胱甘肽進行洗脫，最后用MS技術分析。這種方法主要是研究體外強烈或者穩定的蛋白質間相互作用；可以鑒定兩種已知的感興趣蛋白質可能存在的直接相互作用；尋找可能與目標蛋白存在相互作用關系的未知蛋白。

作為技術依托型的科研技術服務公司，百泰派克生物科技在蛋白互作分析服務及基于質譜的互作蛋白質質譜鑒定分析方面擁有多年經驗。百泰派克提供基于GST pull-down蛋白互作分析服務，及Pull-down靶蛋白質譜鑒定服務。我們以嚴格的質量控制和較短的檢測周期為特色，百泰派克向客戶提供可定制的一站式服務，涵蓋您項目中從基因合成到數據報告的每個步驟。

• 優點：可排除細胞內其他情況的干擾；可以直接檢測蛋白質之間是否有相互作用；方法簡單，操作方便。
• 缺點：在細胞外進行，不能準確的反應細胞內的蛋白質相互作用關系。

3，SILAC與免疫共沉淀質譜聯用的蛋白互作分析

利用SILAC方法分別標記實驗組和對照組細胞后進行Co-IP實驗，依靠抗原與抗體之間的專一性反應分離得到免疫復合物；再通過LC-MS/MS來定性/定量檢測免疫復合物中的蛋白；當實驗組與對照組中某個蛋白質的含量達到統計學差異時，判定這個蛋白質與研究的蛋白具有相互作用，可極大降低蛋白質互作假陽性結果可能性。SILAC技術和Co-IP-MS技術結合可用于高通量定量分析在特定情況下蛋白的互作蛋白網。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺，Orbitrap Fusion質譜平臺，Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供SILAC與免疫共沉淀質譜聯用的蛋白互作分析服務技術包裹（SILAC-based CoIP-MS），您只需要將您的實驗目的告訴我們并將您的細胞寄給我們，我們會負責項目后續所有事宜，包括細胞培養、細胞標記、蛋白提取、抗體IP、效率檢測、蛋白酶切、肽段分離、質譜分析、質譜原始數據分析、生物信息學分析。

How to order?Related Services

互作蛋白分析：

CO-IP免疫共沉淀法蛋白互作分析GST pull-down蛋白相互作用分析

蛋白質譜鑒定/質譜分析：

蛋白膠點、膠條、IP樣品蛋白質鑒定Pull-down靶蛋白質譜鑒定